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用SYSY抗体探索RNA甲基化

 

SYSY是m6A特异性抗体的第一家商业供应商。我们的产品已在700多篇科研发表论文中使用,从而使得研究RNA甲基化的全新方法得以发展。单克隆和重组抗体变体的开发使得非常成功的多克隆抗m6a抗体得到了补充,并保证了最佳的可重复性和批次间一致性。抗m6A抗体适用于广泛的应用,例如MeRIP、m6A-CLIP和miCLIP测序,经典IP、斑点印迹和ELISA。

m6A 抗体

Cat. No. Product Description Application Quantity Price Cart
202 003m6A, rabbit, polyclonal, affinity purifiedaffinity Dot blot IP ELISA MeRIP 50 µgUS$475.00
202 008m6A, rabbit, monoclonal, recombinant IgGrecombinant IgGDot blot IP MeRIP 100 µgUS$415.00
202 011m6A, mouse, monoclonal, purified IgG IgGDot blot IP MeRIP 100 µgUS$415.00
202 018m6A, rabbit, monoclonal, recombinant IgGrecombinant IgGDot blot IP MeRIP 100 µgUS$415.00
202 111m6A, mouse, monoclonal, purified IgG IgGDot blot IP ELISA MeRIP 100 µgUS$430.00
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Result count: 5
 

概览

简介

DNA和RNA水平上的核酸修饰在许多不同的生物过程中起着重要作用。在原核生物中,在DNA 5'-GATC-3'模序上腺苷残基的DAM甲基化使得细胞可在错配修复过程中区分亲本链和子链(A L Lu, D Y Chang, 1988)。在真核生物中,DNA不同的可遗传CpG甲基化模式在基因表达的差异表观遗传调控中发挥重要作用(Meehan et al., 1992)。

RNA分子受多种转录后修饰的影响。在成熟过程中,mRNA分子经历剪接、5′加帽和3′-聚腺苷酸化,这些都是获得具有完备功能的mRNA所必需的(Carter, 1994)。
最近,单核苷酸残基的其他化学修饰已表明会参与蛋白质翻译和RNA加工及其稳定性的微调。其中最重要的修饰是不同RNA残基在不同位置的甲基化,如m1A、m5C、 m6Am和最后但同样重要的N6 -甲基腺苷,也称为m6A,它是最丰富且可能也是最重要的RNA甲基化变体(Zhou et al., 2020)。而像METTL甲基化转移酶复合物这样的m6A writers和像FTO这样的去甲基化erasers (图1),它们可在甲基化转移酶识别位点上微调m6A RNA修饰的可逆状态,即所谓的DRACH模序(Sergeeva et al., 2020)。SYSY抗体从一开始便参与其中。

图1: 转录后RNA甲基化和去甲基化是由writers (METTL复合体)和erasers (如FTO)进行的。而由此产生的位点特异性RNA修饰会进一步影响RNA加工、翻译和稳定性。

 

探索一切的起点,剪接体

1987年,Peter Bringmann和Reinhard Luehrmann开发了第一个针对m6A的多克隆抗体,用于研究这种RNA修饰在真核剪接体中的相关性。这些抗体使得m6A修饰的小核RNA (snRNAs) U2、U4和U6能够从小核蛋白(snRNPs)中定量免疫分离(Bringmann, Lührmann, 1987)。

1997年,SySy将R. Luehrmann和P. Bringmann的原始m6A抗血清纳入其目录,成为了m6A特异性抗体的第一家商业供应商。

通过MeRIP测序发现m6ARNA甲基化

随后,N6 -甲基腺苷或m6A修饰被证实参与了更多的转录后调控过程,而转录组的m6A甲基化成为一个全新的、快速发展的研究领域。Kate Meyer (Meyer et al., 2012)和Dan Dominissini (Dominissini et al., 2012 and 2013)发表的关键论文为我们亲和纯化的m6A兔多克隆抗体(cat. no. 202 003)在全球的成功铺平了道路。Meyer和Dominissini也开发了基于抗体的m6A测序方法,这是一种基于对携带m6A修饰的免疫分离RNA片段(100 -200 nt长)进行平行测序的方法(图2)。

图 2:MeRIP测序是基于对免疫分离m6A修饰的RNA片段的平行测序。

 

这种新技术,又名为MeRIP测序,使得科学家能够发现众多转录后调控机制,且所有这些机制都是由m6A修饰调节的,也引起了科学发表论文数量的持续增长(图3)。

图3:m6A相关的科学发表论文数量随着时间的发展而增长。

 

结果发现M6A峰富集在3' -UTR区域、停止密码子附近和长外显子内(7、8)。研究表明,m6A修饰可以影响RNA生命周期的每个过程,以及许多生理过程,例如干细胞发育、翻译调节、癌症、脂肪形成等等(Linder et al., 2015)。

先进技术

通过MeRIP测序,m6A残基可以映射到100-200 nt长区域。通过将m6A修饰分配到已识别的DRACH模序上,可以极大缩小m6A残基的确切位置。然而,对于单核苷酸分辨率,必须开发更先进的技术。M6A - clip和miCLIP是基于m6A位点特异性UV诱导的交联抗体,在cDNA合成过程中会诱导可预测的突变和截断模式。这使得m6A残基的映射更加精确(Linder et al., 2015, Ke et al., 2015)。

产品

SYSY抗体可助你在RNA甲基化研究中更胜一筹!

Cat. No. Product Description Application Quantity Price Cart
428 003FTO, rabbit, polyclonal, affinity purifiedaffinity K.D.WB ICC IHC-P 50 µgUS$375.00
202 003m6A, rabbit, polyclonal, affinity purifiedaffinity Dot blot IP ELISA MeRIP 50 µgUS$475.00
202 008m6A, rabbit, monoclonal, recombinant IgGrecombinant IgGDot blot IP MeRIP 100 µgUS$415.00
202 011m6A, mouse, monoclonal, purified IgG IgGDot blot IP MeRIP 100 µgUS$415.00
202 018m6A, rabbit, monoclonal, recombinant IgGrecombinant IgGDot blot IP MeRIP 100 µgUS$415.00
202 111m6A, mouse, monoclonal, purified IgG IgGDot blot IP ELISA MeRIP 100 µgUS$430.00
417 003METTL3, rabbit, polyclonal, affinity purifiedaffinity K.D.WB ICC 50 µgUS$375.00
Result count: 7
 

作者:Henrik Martens博士
Synaptic Systems GmbH公司总裁

Henrik在抗体开发、验证及生产方面拥有超过20年的经验。
为满足抗体研究和客户支持的最高标准,他组建了一支具有强大科学背景且具备高素质的专家团队。

 

参考文献

A L Lu, D Y Chang, 1988: Repair of single base-pair transversion mismatches of Escherichia coli in vitro: correction of certain A/G mismatches is independent of dam methylation and host mutHLS gene functions. PMID: 3284785

Bringmann, Lührmann, 1987: Antibodies specific for N6-methyladenosine react with intact snRNPs U2 and U4/U6. PMID: 2951275

Carter, 1994: Spatial localization of pre-mRNA transcription and processing within the nucleus. PMID: 7765739

Dominissini et al., 2012: Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq. PMID: 22575960

Dominissini et al., 2013: Transcriptome-wide mapping of N(6)-methyladenosine by m(6)A-seq based on immunocapturing and massively parallel sequencing. PMID: 23288318

Ke et al., 2015: A majority of m6A residues are in the last exons, allowing the potential for 3' UTR regulation. PMID: 26404942

Linder et al., 2015: Single-nucleotide-resolution mapping of m6A and m6Am throughout the transcriptome. PMID: 26121403

Meehan et al., 1992: Transcriptional repression by methylation of CpG. PMID: 1297654

Meyer et al., 2012: Comprehensive analysis of mRNA methylation reveals enrichment in 3' UTRs and near stop codons. PMID: 22608085

Sergeeva et al., 2020: Modification of Adenosine196 by Mettl3 Methyltransferase in the 5'-External Transcribed Spacer of 47S Pre-rRNA Affects rRNA Maturation. PMID: 32344536

Zhou et al., 2020: Principles of RNA methylation and their implications for biology and medicine. PMID: 32920520